安普霉素是一种具有特殊结构的氨基糖苷类抗生素,在国外已被开发成为兽用抗生素,据报道对治疗犊牛、仔猪和鸡的大肠杆菌病有较好的效果。为了验证国产安普霉素对鸡大肠杆菌病的预防与治疗效果,特对安普霉素饮水预防与注射治疗气囊内接种诱导的鸡大肠杆菌病的效果进行了观察。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试药物 国产安普霉素硫酸盐可溶性粉剂,每1mg含505活性单位;安普霉素注射液,为200mg/ml安普霉素硫酸盐,由武汉君安医药研究所与泓天威药业有限公司提供,批号961108。
1.1.2对照药品 进口安普霉素硫酸盐可溶性粉剂,每1mg含505活性单位,美国礼来公司产品。
1.1.3 菌种 鸡大肠埃希菌O78株,中国兽药监察所提供;攻毒时经2次传代,肉汤培养,37℃温育18-20h备用。
1.1.4 试验动物 400只1日龄京白蛋鸡公雏,购自北京马连洼鸡场,在严格消毒的条件下饲养到3周龄备用。试验前,从鸡群中随机抽检20只,用来菌棉棒从泄殖腔取粪便在麦康凯培养基上培养20h,用大肠埃希氏菌O78标准血清对培养菌做玻片凝集反应,所检样品均为阴性,说明试验鸡不存在大肠埃希氏菌O78感染。
1.1.5 饲料 由中国农业科学院畜牧研究所提供,为全价配合饲料。
1.2 试验方法
1.2.1 试验分为5组,预防组与治疗组均设高、中、低剂量组,药物对照组,不给药攻毒组和不给药不攻毒组(空白对照组)。试验开始后仔细观察和记录鸡只的临床症状、死亡数、剖检死亡鸡只及病理变化,并进行细菌培养和血清学鉴定。在试验期末各组鸡只分别称重,比较各组增重情况。
1.2.2 试验期末剖杀全部存活鸡,记录气囊、心包和肝周的病理变化,按以下标准评判记分,求出各组鸡只的病变指数,比较各组疗效。
气囊炎:0为无变化;1为气囊轻度混浊;2为气囊混浊并有少量渗出物;3为气囊混浊伴有多量渗有出物。
心包炎:0为无变化;1为心包腔中有多量的渗出液;2为心包腔混浊或不透明;3为心包腔中有多纤维素性渗出物。
肝周炎:0为无变化;1为有少许纤维素性渗出物;2为肝表面有明显的纤维素性渗出物;3为纤维素性渗出物沉积、粘连与肝肿胀。
病变指数=病变分数总和/剖检鸡数
1.2.3 试验期末剖杀存活鸡,逐只对气囊、心包、肝等组织做细菌培养,用在肠埃希氏菌O78标准血清鉴定,判明组织携带大肠埃希氏菌O78情况。
2 结果
2.1 安普霉素饮水给药对雏鸡气囊大肠埃希氏菌感染的预防作用
2.1.1 试验鸡于22日龄称重分组,并开始饮水给药5d,23日龄时(给药后24h)攻毒,每只雏鸡于气囊内注射0.15ml大肠埃希氏菌O78肉汤培养液(每1ml含10亿个细菌),攻毒后观察7d。
2.1.2 接种后4-5h,感染组均出现临床症状,表现为精神呆滞,闭目,拒食,两翅下垂,严重者卧床不起,10h后开始出现死亡。尸体剖检可见气囊混浊,有大量渗出物;心包腔中有多量纤维素性渗出物;肝肿胀易碎,被膜增厚,有多量渗出物。病变组织细菌培养,可分离到大肠埃希氏菌O78,详见表1。
表1 安普霉素饮水预防雏鸡大肠埃希氏菌气囊感染效果统计
组别 |
处 理 (g/L) |
鸡 数 (只) |
死亡数 (只) |
死亡率 (%) |
日增重 (g) |
相对增重率 (%) |
病 变 指 数 |
O78株检出率(%) | |||
气囊炎 |
心包炎 |
肝周炎 |
累计记分 | ||||||||
1 2 3 4 5 6 |
国产安普霉素750组 国产安普霉素500组 国产安普霉素250组 进口安普霉素500组 攻毒不给药组 空白对照组 |
30 30 30 30 30 30 |
9 15 18 16 21 0 |
30.0 50.0 60.0 53.0 73.0 0 |
4.8 4.3 3.6 3.9 1.7 6.2 |
77.4 67.7 58.1 62.9 27.4 100 |
1.4 2.2 2.5 2.5 2.8 0 |
1.1 1.8 1.5 1.8 3.0 0 |
1.0 1.8 1.3 0.5 2.6 0 |
3.5 4.8 5.3 4.8 8.4 0 |
10.0 10.0 30.0 20.0 90.0 0 |
2.1.3 从表1可见,安普霉素饮水预防雏鸡后,各组的死亡率明显低于攻毒不给药组,说明其能减少死亡,但仍不能完全保护气囊注射急性感染大剂量大肠埃希氏菌O78毒株鸡免除死亡。从增重效果看,给药组增重明显优于感染不给药组,但低于空白对照组,给药组之间差异不显著,高剂量饮水组略优于低剂量组,国产给药组与进口药对照组相当。
攻毒后第7d,剖杀所有存活鸡,对气囊、心和肝作病变计分,并做细菌培养与血清学鉴定。结果显示,给药饮水组存活鸡的病变指数明显低于有给药攻毒组,给药组之间差异不明显,而给药组鸡大肠埃希氏菌O78的阳性检出率则是显低于潍药攻毒组。试验结果说明,安普霉素饮水给药对经气囊急性感染大肠埃希氏菌的病鸡具有可明显减少死亡、减轻病变的作用。
2.2 安普霉素肌肉注射给药对雏鸡气囊感染大肠埃希氏菌的治疗作用 试验鸡于23日龄经气囊内注射接种大肠埃希氏菌O78,每只鸡1次注射0.15ml大肠埃希氏菌肉汤培养物(每1ml含10亿个菌)。攻毒后4-5h出现临床症状时,各给药组按指定剂量胸肌内注射给药,24h重复注射1次,连续观察7d。结果见表2。
表2 安普霉素注射治疗雏鸡大肠埃希氏菌气囊感染的结果统计
组别 |
处 理 (g/L) |
鸡 数 (只) |
死亡数 (只) |
死亡率 (%) |
日增重 (g) |
相对增重率 (%) |
病 变 指 数 |
O78株检出率(%) | |||
气囊炎 |
心包炎 |
肝周炎 |
累计记分 | ||||||||
1 2 3 4 5 6 |
国产安普霉素20组 国产安普霉素10组 国产安普霉素5组 进口安普霉素10组 感染不给药组 空白对照组 |
30 30 30 30 30 30 |
0 6 8 7 26 0 |
0 20.0 27.0 23.0 87.0 0 |
5.2 4.5 4.2 4.4 1.4 6.2 |
84.0 73.0 68.0 71.0 22.0 100 |
1.0 1.0 1.3 1.1 3.0 0 |
0.2 0.3 0.7 0.9 2.0 0 |
0 0.4 0.3 0.6 1.5 0 |
1.2 1.7 2.3 2.6 6.5 0 |
0 0 0 0 80.0 0 |
由表2可以看出,治疗组注射给药后,鸡精神逐渐好转,食欲逐渐恢复。国产安普霉素高、中、低剂量组及药照组的死亡率分别为0,20.0%.27.0%和23.0%,明显低于感染不给药组(87.0%)。从增重效果看,给药组明显高于感染不给药组,但低于空白对照组,在给药组中,高剂量组优于低剂量组,国产药组与进口药对照组相当。从剖检结果看,给药组病变指数明显低于感染不给药组,而各给药组之间差异不大,经高剂量组病变指数为最低。细菌学检查显示,所有给药组存活鸡组织中均未分离出在肠埃希氏菌O78株,而感染不给药组80.0%存活鸡中可检出大肠埃希氏菌O78株。
3 讨论
3.1 由于经饮水给药的生物利用度仅为11.0%,因此对雏鸡气囊内注射接种大剂量大肠埃希氏菌O78毒株诱发的急性大肠杆菌病的保护率不限,不能完全免除感染造成的死亡,但能够明显地头减少死亡和减轻病变。因此饮水给药方法可能更适用于控制肠道感染或自然感染,而对全身性急性感染应以注射治疗为佳。
3.2 国产安普霉素注射液按20mg/只、10mg/只和5mg/只肌肉注射2次,对气囊注射接种大肠埃希氏菌鸡,根据其死亡率增重、病变指数和带菌率4项指标分析,表明有明显治疗效果,其中高剂量组保护率为100%,国内产品与时进口产品疗效相当。Giebel等(1984)报道,10mg安普霉素肌肉注射给药5d可完全保护大肠埃希氏菌和鼠伤寒沙门氏菌感染鸡。本试验注射给药用2d,每天1次,如增加给药次数和疗程,可能会进一步提高疗效。